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山公尿微量白卵白(ALB)酶联免疫阐发(ELISA
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  qy8千亿国际本试剂仅供研究利用 目标:本试剂盒用于测定山公血清,尿液及相关液体样本中尿微量白卵白(ALB)的含量。

  本试剂盒使用双抗体夹心法测定标本中山公尿微量白卵白(ALB)程度。用纯化的山公尿微量白卵白(ALB)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次插手尿微量白卵白(ALB),再取HRP标识表记标帜的ALB抗体连系,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,颠末完全洗涤后加底物TMB显色。TMB正在HRP酶的催化下成蓝色,并正在酸的感化下成最终的。颜色的深浅和样品中的尿微量白卵白(ALB)呈正相关。用酶标仪正在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过尺度曲线计较样品中山公尿微量白卵白(ALB)浓度。

  1. 血清:室温血液天然凝固10-20分钟,离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心收集上清,保留过程中如呈现沉淀,应再次离心。

  2. 血浆:应按照标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠做为抗凝剂,夹杂10-20分钟后,离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心收集上清,保留过程中若有沉淀构成,该当再次离心。

  3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心收集上清,保留过程中若有沉淀构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

  4. 细胞培育上清:检测排泄性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml摆布。通过频频冻融,以使细胞并放出细胞内成份。离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心收集上清。保留过程中若有沉淀构成,应再次离心。

  5. 组织标本:切割标本后,称取分量。插手必然量的PBS,PH7.4。用液氮敏捷冷冻保留备用。标本融化后仍然连结2-8℃的温度。插手必然量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充实。离心20分钟摆布(2000-3000转/分)。细心收集上清。分拆后一份待检测,其余冷冻备用。

  6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行尝试。若不克不及马长进行试验,可将标本放于-20℃保留,但应避免频频冻融.

  1. 尺度品的稀释取加样:正在酶标包被板上设尺度品孔10孔,正在第一、第二孔平分别加尺度品100l,然后正在第一、第二孔中加尺度品稀释液50l,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100l别离加到第三孔和第四孔,再正在第三、第四孔别离加尺度品稀释液50l,混匀;然后正在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉,再各取50l别离加到第五、第六孔中,再正在第五、第六孔平分别加尺度品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50l别离加到第七、第八孔中,再正在第七、第八孔平分别加尺度品稀释液50l,混匀后从第七、第八孔平分别取50l加到第九、第十孔中,再正在第九第十孔别离加尺度品稀释液50l,混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉。(稀释后各孔加样量都为50l,浓度别离为360g/L,240g/L ,120g/L,60g/L,30g/L)。

  2. 加样:别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操做不异)、待测样品孔。正在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品10l(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃悠混匀。

  5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如斯反复5次,拍干。

  9. 显色:每孔先插手显色剂A50l,再插手显色剂B50l,悄悄震动混匀,37℃避鲜明色15分钟.

  11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应正在加终止液后15分钟以内进行。

  1. 试剂盒从冷藏中取出应正在室温均衡15-30分钟后方可利用,酶标包被板开封后如未用完,板条应拆入密封袋中保留。

  3. 各步加样均应利用加样器,并经常校对其精确性,以避免试验误差。一次加样时间最好节制正在5分钟内,如标本数量多,保举利用排枪加样。

  4. 请每次测定的同时做尺度曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于尺度品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释必然倍数(n倍)后再测定,计较时请最初乘以总稀释倍数(×n×5)。

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